细胞增殖是生命生长、修复的核心过程,从胚胎发育到伤口愈合都离不开它。而异常增殖,更是癌症等疾病的关键信号。作为科研人,选对检测技术,才能精准捕捉细胞 “生长密码”。今天就带大家快速掌握 4 类核心细胞增殖检测技术,帮你避开实验坑!
一、最经典:CCK-8 法
CCK8试剂盒中含有一种叫WST-8的试剂,WST-8在电子耦合剂存在的情况下,可以被活细胞的线粒体内某些酶还原成橙黄色的水溶液甲瓒,生成的甲瓒物质的数量与活细胞的数量成正比,用酶标仪或者分光光度计在450nm波长处测定光吸收值,这样就间接反映出活细胞的数量了。
二、看 “DNA 合成”:EdU 法
细胞增殖时会合成新 DNA,EdU 就是能 “卧底” 进 DNA 的 “标记兵”。它和胸腺嘧啶(T)结构相似,会被分裂的细胞掺入染色体,再用荧光抗体标记,在显微镜下就能看到 “正在分裂的细胞”(发荧光的就是)。
相比老方法 BrdU,EdU 不用解旋 DNA,操作更简单,还能和其他荧光标记(比如标记细胞骨架)一起用,观察细胞增殖时的形态变化。但它也有小缺点:需要荧光显微镜,成本比 CCK-8 高,适合做 “细胞定位” 类实验,比如看肿瘤细胞在组织里的增殖情况。
三、测 “增殖标志物”:Ki-67 免疫组化
有些蛋白只在增殖细胞里表达,Ki-67 就是其中之一 —从 G1 期到 M 期的增殖细胞都有它,静止细胞(G0 期)没有。用免疫组化技术给 Ki-67 染色,染成棕色的就是增殖细胞,数一下棕色细胞占总细胞的比例,就能知道 “细胞增殖率”。
这种方法特别适合临床样本(比如肿瘤组织切片),能直接看患者肿瘤里的增殖活跃程度,帮医生判断病情。但它不能实时检测,只能测 “某个时间点” 的增殖情况,而且需要做切片,操作步骤比前两种多。
四、实时追踪:活细胞成像 + 增殖探针
如果想连续看几天细胞的增殖过程,活细胞成像技术就派上用场了!比如用 CFSE 荧光探针标记细胞:每个细胞分裂一次,荧光强度就减半,在显微镜下观察荧光变化,就能看到细胞分裂的 “动态过程”—— 甚至能数出某个细胞分裂了几次。
这种方法能捕捉细胞增殖的 “细节”,比如不同细胞的增殖速度差异,但对设备要求高(需要活细胞培养箱 + 成像系统),实验周期也长,适合深入研究细胞增殖的动态机制。
|