做 WB 实验的小伙伴，大概都有过这样的经历：跑胶、转膜、孵育抗体一套流程走下来，结果胶片上的条带却 “惨不忍睹”—该有的条带没出现，不该有的杂带倒来了一堆，或者条带模糊得像被揉过的纸。这很可能是蛋白降解在搞鬼！今天就来聊聊蛋白降解在 WB 中的具体表现，帮你快速识别这个 “隐形杀手”。

一、条带位置 “跑偏”，出现低分子量杂带

正常情况下，目标蛋白会在预期分子量位置出现清晰的主条带。但如果蛋白发生降解，你会发现：

• 主条带变弱甚至消失，取而代之的是在低于预期分子量的位置出现一串模糊的杂带（像 “阶梯状” 或 “弥散状”）。（比如，原本在 50kDa 出现的条带，结果在 30kDa、20kDa 等位置出现多个细带，这是因为完整蛋白被酶切成了 smaller 的片段，这些片段依然能与抗体结合，但分子量变小了。）

  
  

二、条带弥散、拖尾，像被 “化开” 的颜料

蛋白降解后，片段大小不一，且可能带有不同电荷，跑胶时就会出现：

• 主条带边缘模糊，向分子量更低的方向 “拖尾”，甚至整个条带变成一片弥散的 “云团”。（这是因为降解产物的分子量差异大，无法在胶中形成整齐的区带，抗体结合后就会呈现这种 “糊掉” 的状态。）

  
  

三、非特异性条带增多，背景 “脏得离谱”

如果蛋白降解严重，还可能：

• 膜上出现大量与目标蛋白无关的杂带，尤其是在低分子量区域，甚至整个膜都呈现不均匀的 “背景色”。（这是因为降解产生的片段可能暴露出原本隐藏的抗原表位，与抗体发生非特异性结合；或者降解的蛋白片段附着在膜上，干扰了信号检测。）

  
  

四、内参蛋白也 “遭殃”，排除样本制备问题

内参蛋白（如 β-actin、GAPDH）通常表达稳定，分子量较小且不易降解，常被用作实验对照。但如果：

• 内参条带也出现上述降解表现（杂带、弥散），说明问题可能出在样本制备环节（如裂解液中未加蛋白酶抑制剂、反复冻融样本等），导致整体蛋白降解。

• 反之，若内参正常而目标蛋白降解，可能是目标蛋白本身不稳定（如某些分泌蛋白、酶类），需要针对性优化保存条件或缩短检测时间。

  
  

五、信号强度忽高忽低，重复性差

同一批样本，甚至同一样本的重复孔，条带强度差异很大：

有的孔条带清晰，有的孔却几乎看不到主条带，只剩杂带。

这可能是降解过程不均匀导致的 ——样本中蛋白酶活性不稳定，部分区域的蛋白降解更彻底，部分区域还保留完整，最终信号呈现 “随机波动”。

那如何快速判断是否是蛋白降解呢？

1.对比阳性对照：如果已知的阳性样本（如标准品）条带正常，而你的样本出现上述问题，大概率是样本降解。

2.检查实验流程：是否忘记加蛋白酶抑制剂？样本是否反复冻融？裂解时是否在冰上操作？这些都是蛋白降解的常见诱因。

蛋白降解就像 WB 实验的 “隐形炸弹”，早发现才能早补救。记住这些典型表现，下次遇到条带异常时，不妨先排查是否是降解在捣乱，毕竟，干净的条带才是实验成功的第一步呀！