无菌：
是灭菌的结果，指用物理或化学方法使存在于产品中的所有微生物（包括最耐热的细菌芽孢）失去活性，使它不能有生存和繁殖的机会（绝对无菌）。
消毒：
杀灭或清除传播媒介上病原微生物，使其达到无害化的处理（不一定杀灭芽孢）。
无菌技术：
是指在医疗、护理操作中，防止一切微生物侵入人体和防止无菌物品、无菌区域被污染的操作技术。
目的：
• 防止一切微生物侵入机体。
• 保持无菌物品及无菌区域不被污染。
• 使已使用的无菌物品保持无菌状态和有效时间。
2 细胞房区域的无菌介绍
常规细胞房的构造含有无菌操作区、孵育区、制备区、清洗消毒灭菌区和储藏区。
1、无菌操作区：只限于细胞培养及其他无菌操作，最好能与外界隔离，不能受到穿行或受其他干扰。一般由更衣间、缓冲间和操作间三部分组成。
更衣间：用于更换实验服，鞋子及穿戴帽子、口罩、手套。
缓冲间：位于更衣间与操作间之间。目的是为了保证操作间的无菌环境，同时可放置细胞培养箱及某些必需的小型仪器。
无菌操作间：专用于无菌操作、细胞培养。
2、孵育区：孵育区对无菌的要求较低点，但仍需要保持清洁无尘。减少外界干扰和穿行的区域。
3、试剂准备区：主要进行培养液及有关培养用的液体制备。
4、清洗消毒灭菌区：主要进行所有细胞培养过程使用的器具清洗、准备、消毒及三蒸水制备等工作。
5、储藏区：主要存放各类冰箱、干燥箱、液氮罐、无菌培养液、培养瓶等设备。此环境需要清洁无尘。
3 实验室常见的灭菌方法
根据灭菌对象不同，灭菌的方法不同
1、高压蒸汽灭菌
● 适用于药品、容器、培养基（细菌类）、无菌衣及其他遇高温和潮湿不发生变化或损坏的物品。
● 过程：100kpa 121℃ 20min。
● 利用高压蒸汽以及在蒸汽环境中存在的潜热作用和良好的穿透力，使菌体蛋白质凝固变性而使微生物死亡。
缺点：如对培养基或液体溶液灭菌，灭菌的时间与样本体积有关，时间不足达不到灭菌效果，时间过长会影响样本内的物质活性。
2、干热灭菌
● 适用于耐高温、干燥的物品，玻璃器皿和金属用具等。
● 过程：120-150℃，90-120min，杀死细菌和芽孢。
● 主要适用于不便在高压蒸汽灭菌器中灭菌，且不易被高温损坏的玻璃器皿、金属器械以及不能和蒸汽接触的物品的灭菌。
缺点：适用性不强。
3、射线灭菌法
● 适合于实验室空气、地面、操作台面灭菌。
● 利用紫外线灯进行照射灭菌方法。紫外线是一种低能量的电磁辐射，可以杀灭多种微生物。紫外线的作用机制就是通过对微生物的核酸及蛋白质等的破坏作用而使其灭活。
缺点：紫外线杀菌效果一般，对培养物和一些试剂会产生不良影响。
4、过滤除菌法
● 适用于血清、细胞培养基等热不稳定的生物制品及空气的除菌。
● 将液体或气体通过有微孔的滤膜过滤，使大于滤膜孔径的细菌等微生物颗粒阻留，从而达到除菌的方法。
缺点：过滤法除菌大多用于遇热易发生分解、变性而失效的试剂、酶液、血清、培养液等。
5、化学灭菌法
指用化学药品来杀灭微生物的方法。同一种化学药品的低浓度时呈现抑菌作用，而在高浓度时则能起杀菌作用。
杀菌机理：能使微生物蛋白质变性死亡，或与酶系统结合影响代谢，或改变膜壁通透性使微生物死亡等。
● 消毒剂消毒法
消毒是指杀死病原微生物的方法。但化学消毒剂大多仅能杀死微生物的繁殖体而不能杀死芽孢，能控制一定范围的无菌状态。常用于物体表面灭菌，但要注意消毒液浓度不宜过高，以防止化学腐蚀作用。
● 化学气体灭菌法
指利用化学药品的气体或产生的蒸汽进行杀灭微生物的方法。
环氧乙烷灭菌法：传统的灭菌法，可应用于工衣灭菌，不耐加热灭菌的药品、医用器具、设施、设备等灭菌。重要影响因素：温度、湿度、气体浓度、灭菌时间。
● 甲醛等蒸汽熏蒸法
采用甲醛、丙二醇或过氧醋酸等化学品，通过加热产生蒸汽进行空气环境灭菌。
● 臭氧消毒法
臭氧在常温、常压下分子结构不稳定，很快自行分解成氧分子和单个氧原子，后者具有很强的活性，对细胞有极强的氧化作用，臭氧氧化分解了细菌内部氧化葡萄糖所必须的酶，从而破坏其细胞膜，将其杀死，多余的氧原子则会自行重新结合成为普通氧分子，不存在任何有害残留物，故称为无污染消毒剂。
5 显微镜使用注意事项
*常规显微镜使用前后可使用酒精棉球擦拭载物台。载物台如有污染物，需要仔细清洁后再使用。
● 使用完毕，请及时关闭灯光与电源。必要时请套上防尘罩。
4 超净工作台/生物安全柜使用注意事项
*所有使用人员在开始实验前，请用紫外线灯正确照射30min。工作台面上的操作均要保证无菌。
● 开启后，请用酒精棉球擦拭工作区域，或者喷洒酒精后用无尘纸擦拭，所有放入超净台或生物安全柜的物品均需要消毒擦拭。
● 准确设置操作台面的不同区域，有序开展实验操作。
● 操作结束，及时清理个人物品，清洁工作台面，开启紫外线灯消毒。
6 细胞培养箱使用注意事项
*细胞培养箱按照正确方法进行安装、校准、使用、维护。定期清洁，保证培养箱正常运作，避免细胞污染。
● 培养箱需要定期使用消毒液擦拭内表面进行消毒，正常取放培养物均可以消毒双手或门把手等。
● 培养箱的水盘定期灭菌，根据实际情况换水（高压灭菌水或纯水）。如出现培养箱污染，需要添加水盘清除剂（VivaCell，C3480-0100），必要时更换培养箱的滤芯等。
7 水浴锅使用注意事项
*所有放入水浴锅的物品均要避免渗漏。如有渗漏需要及时换水，并做彻底消毒清洁，避免污染其他物品等。
● 水浴锅使用注意用电安全。注意水位，避免空烧。
● 水浴锅内如出现异物，请及时清洁换水，如出现污染，请使用水浴锅清除剂。
8 离心机使用注意事项
*所有放入机器进行离心的样本均要进行配平处理。严禁开盖运转操作。
● 请选择合适的转子，离心时请保证液体体积不能超过离心管总体积的2/3。
● 离心机内部如有冷凝水，请及时使用无尘纸擦拭。如遇液体样本漏出，及时清洁干净。
9 其他试剂耗材使用注意事项
*所有细胞实验中使用到的试剂耗材均需要无菌处理。如有重复使用的耗材，请按照正确的清洗、灭菌等程序进行验证测试。
● 细胞培养相关试剂正确储存。为保证使用质量，请在开封后尽快使用，避免质量下降或者污染。
● 耗材产品需要正确保存，避免包装破损导致产品污染。已经开封外包装的产品可保存于生物安全柜或超净台内。
