今天来盘点下WB常用的封闭液，以及各自的优缺点和注意事项。

（1）5%脱脂乳

无论是做WB还是做IFA（间接免疫荧光），5%脱脂乳的封闭效果都是比较好的。5%脱脂乳既可以用来封闭，也可以用来稀释一抗和二抗，夏季回收的脱脂乳稀释的抗体容易发臭和絮状沉淀。

缺点是脱脂奶粉中含有大量的酪蛋白，是一种磷酸化蛋白，如果要WB检测磷酸化蛋白的话，就最好别用脱脂奶，否则会产生高背景。WB检测磷酸化蛋白时，可以用5%的BSA封闭。

另外，如果时做Streptactin-HRP 的话，不建议用脱脂乳封闭，因为脱脂牛奶中含有生物素化蛋白，这时候推荐用BSA封闭。

（2）5%BSA（牛血清白蛋白）

5%BSA的封闭效果较好，尤其是在WB检测磷酸化蛋白时，并且和链霉亲和素系统兼容。5%BSA溶液也可以用来稀释一抗和二抗。

缺点是价格较贵，所以一般WB时不用5%BSA，因此WB封闭膜的时候，封闭的用量比较大，不实惠。而在做IFA（间接免疫荧光）时，对封闭液的用量少，此时可以用5%BSA来封闭。

（3）快速封闭液

现在很多厂家都推出了快速封闭液，封闭时间只要10分钟，大大缩短了实验时间。快速封闭液可以用来检测磷酸化的蛋白，但是不能用来检测生物素标记的蛋白。因为成分不是动物来源的蛋白，所以不会和抗体发生交叉反应和非特异性结合，所以背景会比较低。

（4）纯化的酪蛋白

成分是纯化的酪蛋白，不含其他杂质，可以减少和膜上的待检测蛋白的非特异性结合，从而降低背景。效果类似于纯化的BSA（牛血清白蛋白）。

缺点也是不适用于检测磷酸化的蛋白。

（5）血清

血清也能用来当封闭液，但是和脱脂乳、BSA等其他封闭液相比，没有明显的优势，所以几乎没人用。血清也会和动物来源的抗体发生交叉反应，背景比较高。

（6）猪皮明胶

（7）鱼皮明胶

鱼皮明胶是由猪皮明胶演变来的，没有血清里的蛋白，所以不会和动物来源抗体发生交叉反应，因此背景比较低。目前几乎没人用鱼皮明胶来当封闭液了。鱼皮明胶里有天然的生物素，所以不能用来检测生物素标记的蛋白。