提取完DNA或RNA之后,通常需要测浓度。这也是质检的主要方法。观测指标也就是260/280 and 260/230 Ratios,所以下面分别介绍:
【OD230】提取核酸时会用到各种化合物,它们以盐离子的形式存在,例如胍盐、苯氧基离子、硫氰酸酯。这些盐离子对230nm波长的紫外光有强烈的吸收值。如果测定核酸时,发现OD230数值很高,代表溶液中的盐离子浓度很高。
【OD260】双链DNA在这个波长下会对光有强烈的吸收。
【OD280】芳香族氨基酸在这个波长下,有强烈的光吸收。如果该数值很高,代表DNA溶液中可能存在蛋白质的污染。
【OD320】通常是由光散射造成的。如果该数值很高,意味着溶液内有颗粒物污染、待检器皿例如比色皿有污渍。
260/280 Ratio
260 nm和280 nm处的吸光度比用于评估DNA和RNA的纯度。通常认为~1.8的比例是DNA的“纯”比例;一般认为~2.0的比率为RNA的“纯”。如果这两种情况下的比率明显较低,则可能表明存在蛋白质、苯酚或其他污染物,这些污染物在280 nm处或附近强烈吸收。
260/230 Ratio
这个比率被用作核酸纯度的第二个衡量标准。“纯”核酸的260/230值通常高于相应的260/280值。预期的260/230值通常在2.0-2.2范围内。如果该比率明显低于预期,则可能表明存在在230 nm处吸收的污染物。
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