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【五分钟讲实验】实验动物不同脏器取材方法及病理/电镜组织取材注意事项
阅读:259次 | 来源:医学科研小坑 | 2024/2/7 8:37:03

                                                                   实验动物脏器取材注意事项

① 若发现肉眼可视病变应认真观察并取准病变部位组织,切勿漏取,全面反映组织病变全貌若有肿瘤的话,包括肿瘤转移部位、切缘等。全面描述病变状况,由表及里地观察病变状况,测重量、记录部位、体重等。

② 若无肉眼可视病变,可代表性取材。

③ 根据实验方法、目的、病变、特殊病变等要求尽量多取材川。选取的组织材料要包括各脏器的主要结构部分。

④ 应避免选取因解剖失误造成的凝血块和坏死组织等。

⑤ 取病理材料时勿压挤(组织变形)刮抹(组织缺损)、冲洗(红细胞和其他细胞吸水肿胀破裂)

⑥ 所取材料应尽量保持肉眼标本的完整性不宜过厚或过薄。建议选用1.5cmX1.5cmx0.5cm的取材规格。

                                               取材后病理定量分析注意事项

① 常规HE染色,切片厚度应≤4μm。

② 光镜下首先区分有否特异性病变及范围,然后由脏器一端向另一端进行整体观察和描述。

③ 观察小动物脏器有否肿大、增生,用10倍镜由一端开始计数该脏器包含的10倍镜镜头视野数,或计数整个切片中功能单位数。如脾生发中心、胸腺小叶、肝小叶、肾小球及整个切片中病变灶数量。

④ 大动物脏器疑有肿大、增生时,用40倍镜头计数每一视野中的细胞或功能单位数。心肌、骨骼肌在与长轴平行的切面上计数每一视野直径中的肌纤维数‚肝小叶中肝细胞索数(数40倍镜视野的一半)。根据需要计数10~20个40倍镜视野。

⑤ 确定病灶大小及积分用40倍镜头进行观察。先将镜头的圆周与观察的病灶边缘相切,再观察该病灶在这一视野中的比例。

⑥ 实验动物肿瘤发生率的计算:动物肿瘤的组织分化常不明显,在长期毒性试验或诱癌实验中出现的肿瘤不论良、恶性均计入肿瘤发生数,并计算肿瘤发生率。

                                         实验动物组织电镜取材注意事项及要求

电镜生物样品的取材,正确与否决定着实验结果的准确性,电镜要求样品必须忠实地反映其生活时的状态,应尽量避免“死后改变”和人为假象的发生,现将电镜取材注意事项总结如下:

① 取材部位要准确: 器官、部位要准确,如观察肾小球需取肾皮质而不要取到肾髓质。

② 动作迅速: 活体(血供未断)取材,料离体后需在1min内放入固定液(戊二)使组织尽可能保持原来的生活状态。

③ 材料体积要小: 一般不超过1m使组织得到均匀而充分的固定,需要定向包埋的样品(如皮肤肌肉、血管等)应切成1x3mm'的长条。

④ 机械损伤要小: 取材应用锋利、清洁的双面刀片(新刀片应用酒精去除刀锋上的油脂),尽量避免牵拉和挤压。

⑤ 低温: 固定液4保存,取材所需器械应进行预冷,取材过程在冰盒上进行,取好的样品放在含固定液的小瓶中4C保存,尽量降低酶的活性,减少细胞的损伤。




 

 
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