取材后病理定量分析注意事项
① 常规HE染色,切片厚度应≤4μm。
② 光镜下首先区分有否特异性病变及范围,然后由脏器一端向另一端进行整体观察和描述。
③ 观察小动物脏器有否肿大、增生,用10倍镜由一端开始计数该脏器包含的10倍镜镜头视野数,或计数整个切片中功能单位数。如脾生发中心、胸腺小叶、肝小叶、肾小球及整个切片中病变灶数量。
④ 大动物脏器疑有肿大、增生时,用40倍镜头计数每一视野中的细胞或功能单位数。心肌、骨骼肌在与长轴平行的切面上计数每一视野直径中的肌纤维数肝小叶中肝细胞索数(数40倍镜视野的一半)。根据需要计数10~20个40倍镜视野。
⑤ 确定病灶大小及积分用40倍镜头进行观察。先将镜头的圆周与观察的病灶边缘相切,再观察该病灶在这一视野中的比例。
⑥ 实验动物肿瘤发生率的计算:动物肿瘤的组织分化常不明显,在长期毒性试验或诱癌实验中出现的肿瘤不论良、恶性均计入肿瘤发生数,并计算肿瘤发生率。
实验动物组织电镜取材注意事项及要求
电镜生物样品的取材,正确与否决定着实验结果的准确性,电镜要求样品必须忠实地反映其生活时的状态,应尽量避免“死后改变”和人为假象的发生,现将电镜取材注意事项总结如下:
① 取材部位要准确: 器官、部位要准确,如观察肾小球需取肾皮质而不要取到肾髓质。
② 动作迅速: 活体(血供未断)取材,料离体后需在1min内放入固定液(戊二)使组织尽可能保持原来的生活状态。
③ 材料体积要小: 一般不超过1m使组织得到均匀而充分的固定,需要定向包埋的样品(如皮肤肌肉、血管等)应切成1x3mm'的长条。
④ 机械损伤要小: 取材应用锋利、清洁的双面刀片(新刀片应用酒精去除刀锋上的油脂),尽量避免牵拉和挤压。
⑤ 低温: 固定液4保存,取材所需器械应进行预冷,取材过程在冰盒上进行,取好的样品放在含固定液的小瓶中4C保存,尽量降低酶的活性,减少细胞的损伤。