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ELISA实验中优化包被的方法ELISA实验中优化包被的方法
阅读:338次 | 来源:恩典生命科学 | 2023/1/16 15:18:27

一、挑选合适的包被抗原

包被抗原可分为天然蛋白,重组蛋白和小分子抗原三类。天然蛋白通过直接吸附净化包装要求,许多杂质抗原的间接方法可以捕获数据包(和靶抗原反应物质如直接吸附在酶标板,然后通过抗原抗体的固相的特异性反应)。重组蛋白的纯化通常可以直接涂。小分子抗原如肽和一些小分子有机化合物,分子量太小,很难直接吸附在酶标板,通常和不相关的蛋白质如牛血清白蛋白,耦合,耦合的固相载体上的吸附。

二、挑选合适的包被液

一般是一个ph9.6碳酸盐缓冲液,如果包被抗原在碱性条件下不稳定,也可以用pH7.2磷酸盐缓冲溶液。

三、选择合适的包被温度

通常在4-8度为2小时通宵或37度的条件下,我们强烈建议4-8温度范围,有利于保持蛋白的活性。选择4层浓度包被固相载体和涂层性能改变物质的最佳浓度,总蛋白涂层浓度1-5ug/ml,应该明确涂层的最佳浓度的特异性抗原的实验测定。

四、包被后的封闭选择

封闭是否必要,取决于酶联免疫吸附模型和具体实验条件。一般来说,双抗体夹心法,只要酶标记物是高活性的,操作清洗彻底,无闭也可以得到满意的结果。测定及间接的方法,一般的封闭是必不可少的。常见的密封胶主要有0.5%牛血清白蛋白,10%胎牛血清,明胶1%,脱脂奶粉5%,abmart建议使用5%脱脂奶粉,但脱脂奶粉5%只适合短期使用,不要长期保存。

在ELISA实验中,包被是非常重要的步骤,大家学会了优化包被的方法,会使实验的结果更加准确,所以大家要多加学习。 

 

 
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