我叫小郭，是莫愁师姐的师妹，我也不知道为啥开头总是这句。好吧，说重点，我的细胞被污染了，我的细胞被污染了，我的细胞被污染了。重要的事情说三遍，虽然暂时还不知道是什么污染，但问题是，就只有这一皿了，液氮罐里也没有了，没有了，没有了！重要的事情说三遍。

我觉得我还可以抢救一下……师姐……

莫愁：养细胞总会有这样的事情，污染了，但你又想抢救，在不要污染到别人的情况下（特别是支原体或者真菌污染，必须单独处理，封好细胞，最好用Flask），用抗生素可以抢救一下。

首先确定到底是啥污染，不同的微生物用不同的抗生素。

真菌（霉菌或者酵母）的话，其实是最危险的，因为孢子会飘散，这样会扩大污染面积，需要用比较强的抗生素来抢救。一般是采用0.25–2.5 μg/ml的可溶性两性霉素B溶液（培养基中的终浓度），37℃培养，处理三天，然后换成正常的培养基进行复苏。

如果是细菌的话可以采用硫酸庆大霉素5–50 μg/ml，或者硫酸新霉素50 μg/ml，或者硫酸卡那霉素100 μg/ml，或者硫酸链霉素50–100 μg/ml（四种任意一种，不要都加进去，浓度都是培养基中的终浓度）在37℃培养，处理五天（链霉素只能处理三天），然后换成正常的培养基进行复苏。

针对革兰氏阴性菌，可以用硫酸多粘菌素B 100 units/ml在37℃培养，处理五天，然后换成正常的培养基进行复苏。

支原体污染的话，可以考虑用高温处理，由于支原体比较不耐高温，所以将有支原体污染的细胞在42℃环境下处理5-10小时（不要超过18小时），后可以去除支原体。还有一种抢救方法也比较极端，就是将细胞消化后，注射到小鼠腹腔，用动物的免疫能力来杀灭支原体。当然也可以用抗生素，比如硫酸庆大霉素5–50 μg/ml，或者盐酸米诺环素15–30 μg/ml，或者罗红霉素10–20 μg/ml，或者延胡索酸泰妙菌素0.05–1.5μg/ml（四种任意一种，不要都加进去，浓度都是培养基中的终浓度）在37℃培养，处理五天，然后换成正常的培养基进行复苏。

所有的处理方法对于细胞都是有损伤的，有的比如泰妙菌素和两性霉素B对细胞的损伤是非常大的。所以，一般来说，进行抗生素抢救的话，最好这样来进行抢救的操作：

1）先用胰酶对要抢救的细胞进行消化（如果还没死透的话）；

2）然后将抗生素分成不同的浓度梯度，对不同皿的细胞进行处理；

3）观察细胞，挑对细胞影响较小的浓度的抗生素处理；

4）处理完成，换成普通培养基后，扩大培养，传2-3代后，确保无微生物污染为止。

…华丽丽的分割线…

李莫愁博士：对了，大家不要忘记，所有的抗生素，都需要用抽滤灭菌哦！否则这污染也是挡不住的，为啥要强调硫酸XX霉素呢？因为这样才是可溶的啊，否则这些在过滤的时候，全都滤掉了。看到这么烦人的步骤，要换了我，就直接扔掉！所有的普通的细胞系买到后第一件事情就是扩大培养后全部冻存起来，还要建立一个液氮罐的库，知道还剩多少支细胞，不要等到都污染了之后才想起来要抢救，说不定到最后只能扩大污染。但对于那些不能传代的细胞而言，比如原代细胞，要是实在没办法了，也只能抢救一下了。好了，今天就策到这里吧。