我叫林平之，是莫愁师姐的师弟，过完国庆，轻松了一周啊，爽！昨天铺板种的细胞，今天打开培养箱的时候，哈哈哈哈……哈你妹啊，我的细胞全部告别人世了……享年九十六岁，过早地离开了我们。（Hela细胞……）

还有几盘好像长得好慢，感觉还能抢救一下样的，师姐，到底是怎么回事呢……

莫愁：一般打开培养箱，看到细胞傻眼会有这样几种情况哈：

1）培养基颜色变了，细胞挂了

2）细胞不贴壁，细胞挂了

3）细胞生长缓慢，细胞挂了一部分

4）细胞全挂了

我们一个个来看，首先是培养基颜色变了，这个非常简单，就是pH变了，导致细胞挂了。长假过后经常会出现这样的情况，有好多是忘了开二氧化碳的气阀。没二氧化碳，很容易导致培养基的酸碱平衡体系产生变化，培养基pH上升，培养基就变紫了。当然，除了二氧化碳的气阀，还有你的培养瓶的瓶盖是不是拧得特别紧，太紧的话，也是会pH上升的。所以有的时候不是越紧越好的……

细胞污染也会使得培养基颜色产生变化，比如，一晚上就变黄，就基本上是污染了。支原体污染，也会导致培养基颜色变化。这样的细胞，要么扔掉，要么你觉得还能抢救一下，就再抢救一下试试看。具体怎么抢救，以后再说。

细胞的衰老和初始接种细胞量太低，也可能会导致培养基的pH产生差异。老化的细胞，就只能扔了。培养基也需要注意，培养基和血清不要暴露在外面太久，否则也一样会导致培养基pH变化，使得细胞离开人世……

接着是细胞不贴壁，这个也是常见的傻眼模式，为啥细胞会不贴壁么？简单讲，可能就是因为你胰酶消化过度了。这样会损伤细胞，使之无法贴壁。除此之外，就是细胞中可能会有一些支原体的污染了。细胞铺板时的密度太高或者太低，也会有这样的情况发生。当然，还有细胞老化，或者冻存细胞时的损伤，也会导致细胞无法贴壁，这样的细胞，只能扔了，因为可能会影响后续实验。还有一点必须要注意的是，血清要是过期了或者变质，会导致血清中的细胞粘附因子的失活，当然一般保存得当应该问题不大。

细胞生长缓慢的话，比较可能的是细胞在冻存复苏的过程中有了较大的损伤。或者是在培养基中的一些促细胞生长的因子，比如谷氨酰胺耗尽。当细胞铺板的密度过高或者过低的情况下，也会导致细胞生长缓慢。

一般来说，96孔板铺板的细胞大约保持在每孔5k左右，6孔板铺板在每孔5w到10w个细胞左右，24孔板在1w-2w个细胞。（划痕实验和耐药实验除外哈，这两个实验都是要细胞长到80%的，以六孔板为例，6孔板中每孔细胞长满后，大约是100w-150w个）

细胞要是直接挂了，那就综合一下之前的几点就行了，差不多就这么几种可能让你的细胞全部走完漫长的毛一百年的生命，告别人世了……当然，还有你的细胞，如果不及时换液的话，或者为了抢救细胞，抗生素加过量的话，一样会让细胞挂干净的。

…华丽丽的分割线…

李莫愁博士：长假过完，收收心，该复苏的就要复苏，但是一定要注意各种情况。养细胞就跟做铲屎君差不多，要贴心地为他们服务，这样才能让他们长命百岁……好了，今天就策到这里吧。